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内参蛋白GAPDH检测试剂盒(Western方法)图片
产品货号:
YTC0701
中文名称:
内参蛋白GAPDH检测试剂盒(Western方法)
英文名称:
SuperFast Western Assay Kit for GAPDH
产品规格:
6T|30T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是一种从完成转印的印迹膜到获得内参蛋白GAPDH条带的超快速Western检测试剂盒,仅需10分钟即可完成,兼容人、小鼠、大鼠等的GAPDH。本试剂盒包含了Anti-GAPDH-HRP、FastBlock封闭和抗体稀释液、Western洗涤液、以及BalbECL Star化学发光试剂的试剂盒,一抗和二抗孵育合并为一步操作,使用便捷,背景低,包含从封闭到化学发光的整套试剂,转膜完成后通常10分钟就可以得到高质量的内参蛋白Western结果,可以极大加快内参蛋白的检测速度。


本试剂盒中的FastBlock封闭和抗体稀释液,可同时用于印迹膜的封闭和抗体的稀释。封闭时间仅需1分钟,总体效果显著优于传统的基于BSA(牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液。本制品稀释和配制的内参抗体工作液,可以在4℃保存和使用不少于1个月,并且可以重复使用。


本试剂盒使用了Anti-GAPDH-HRP,因此一抗和二抗的孵育仅需一步即可完成。抗体特异性高、灵敏度极佳,使用浓度经过优化,按照1:500比例稀释,室温通常孵育5分钟即可进行后续的洗涤和检测。


本试剂盒中提供的BalbECL Star化学发光试剂,灵敏度高、背景极低、发光时间长,适用于大多数常规的Western检测。特殊情况下,如果成像效果需要优化,可根据当前实验结果选择灵敏度更高的BalbECL UTBalbECL SuperUT




组分6T30T
Anti-GAPDH-HRP20μL100μL
FastBlock封闭和抗体稀释液40mL200mL
Western洗涤液200mL2×500mL
BalbECL Star A液3mL15mL
BalbECL Star B液3mL15mL

保存:-20℃,有效期1年。


FastBlock封闭和抗体稀释液、Western洗涤液以及BalbECL Star A液和B液,4℃保存,至少6个月有效。


如果检测的是6.6×8.5cm印迹膜,按照每次Western封闭需要FastBlock封闭和抗体稀释液5mL,稀释抗体需要FastBlock封闭和抗体稀释液5mL,抗体10μL,稀释后的抗体共计可以使用3次,洗涤液每次使用10mL,化学发光试剂工作液每次需要1mL计算,本试剂盒的两种规格分别可以进行6次和30次GAPDH的Western快速检测。如果检测的是更常见的裁切后的约2×8.5cm印迹膜,按照封闭以及抗体孵育液体用量为每次2mL,洗涤液用量每次4mL,发光试剂工作液用量每次0.4mL计算,两种规格分别可以检测15次和75次。




  • 本制品可用于人、小鼠、大鼠的GAPDH的检测,其它种属建议先进行预实验。
  • 请注意回收使用过的抗体工作液。回收的抗体工作液可以再重复使用2次。稀释后的抗体,包括使用过的抗体工作液,请4℃保存。
  • 回收后重复使用的抗体工作液,使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以10000×g离心1~3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体工作液出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。
  • 使用本制品,通常10分钟可得到高质量的内参蛋白Western结果,即封闭1分钟、抗体孵育5分钟、洗涤30秒3次、BalbECL试剂孵育1分钟、成像通常0.5分钟之内。
  • 个别情况,如果希望获得到更好的Western结果,可适当增加封闭、抗体孵育及洗涤的时间,并适当优化成像的曝光时间。
  • BalbECL Star A液和B液均对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。



使用本试剂盒从完成转印的印迹膜开始实际操作约10分钟,检测获得的GAPDH条带的效果,请参见图1。
内参蛋白GAPDH检测试剂盒(Western方法)
图1.内参蛋白GAPDH检测试剂盒(Western方法)的检测效果图。其中293T细胞裂解液蛋白浓度为2.7mg/mL,Hela细胞裂解液蛋白浓度为2.5mg/mL。FastBlock封闭和抗体稀释液封闭1分钟,抗体稀释比例为1:500,抗体孵育5分钟。Western印迹成像由化学发光成像系统完成。曝光时间:293T和HeLa样品为10秒,小鼠肝脏组织为4秒。GAPDH的分子量约36kDa。根据灰度分析,各蛋白裂解液样品的GAPDH条带灰度与上样量成相应的比例关系。实际实验结果会因样品、抗体、实验条件等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。


以6.6×8.5cm的印迹膜为例:
  • 膜的封闭:
    • 完成转膜后,立即把印迹膜(约6.6×8.5cm)放置到预先加入5mL FastBlock封闭和抗体稀释液的洗膜盒中,置于翘板摇床上缓慢摇动,室温封闭1分钟。后续如果无特殊说明,各种试剂的用量都以约6.6×8.5cm大小的印迹膜为例进行说明。
      • 经反复测试,室温封闭1分钟即可达到理想的封闭效果,但也可以根据实际情况酌情延长封闭时间。如果需要更多的封闭液,推荐FastBlock Western封闭液
      • 如果使用裁切后的约2×8.5cm印迹膜,推荐使用2mL FastBlock封闭和抗体稀释液。
  • 抗体孵育:
    • Anti-GAPDH-HRP抗体工作液的配制。推荐抗体稀释比例为1:500,例如在5mL FastBlock封闭和抗体稀释液中加入10μL Anti-GAPDH-HRP,即可得到5mL Anti-GAPDH-HRP抗体工作液。
      • 通常1:500稀释可以适用于大多数情况,但如果遇到样品中目的蛋白过少或过多时,也可以根据实际情况在1:250~1:1000范围内进行调整。如果需要更多的抗体稀释液,推荐Western一抗稀释液
    • 用微型台式真空泵、移液器或滴管等吸尽用于封闭的FastBlock封闭和抗体稀释液。
    • 加入5mL Anti-GAPDH-HRP抗体工作液。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜,推荐用量为2mL。
    • 置于翘板摇床上缓慢摇动,室温孵育5分钟。
      • 经反复测试,室温孵育5分钟即可达到理想检测效果,但也可以根据实际情况酌情延长抗体孵育时间。
    • 回收抗体工作液,留待后续重复使用。
    • 使用Western洗涤液洗涤3次,每次的用量为10mL,每次30秒。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜,每次的推荐用量为4mL。
      • 经反复测试,洗涤3次,每次30秒,即可达到理想效果,但也可以根据实际情况每次酌情延长洗涤时间或增加洗涤次数。如果需要更多的Western洗涤液,推荐Western洗涤液Western洗涤液(10X)
  • 蛋白检测:
    • BalbECL Star工作液的配制:混合0.5mL BalbECL Star A液和0.5mL BalbECL Star B液,配制成1mL BalbECL Star工作液,室温放置备用。工作液宜在临检测前配制。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜,BalbECL Star工作液配制0.4mL即可。
    • 用平头镊子将膜取出,用吸水纸略吸去过多的液体(切勿接触膜的蛋白面),然后置于一洁净保鲜膜上。
    • 滴加1mL BalbECL Star工作液到膜上,确保使工作液均匀覆盖在膜上,放置1分钟。如果是裁切后的约2×8.5cm印迹膜,BalbECL Star工作液的推荐用量为0.4mL。
      • 通常放置1分钟就可以进行后续的成像或压片检测,但也可以根据实际情况酌情延长放置时间。如果需要更多的发光试剂,推荐BalbECL Star
    • 取膜,弃BalbECL Star工作液,用吸水纸略吸去过多的液体。将膜放在两片保鲜膜中间,随后进行化学发光成像仪检测或压片检测。

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